Einfluss der Mutation T109M auf die Proteinbindungseigenschaften von Profilin1: weiterführende Untersuchung der ALS-assoziierten Mutation

Abstract

Diese Arbeit beschäftigt sich mit den ALS-verursachenden Mutationen in Profilin1. Ziel dieser Arbeit war die nähere Untersuchung der Profilin1-Mutation T109M und deren Einfluss auf die Bindung zu Interaktionspartnern. Dazu wurde die Bindung zu verschiedenen Liganden mit einer Co-Immunpräzipitation in vitro, sowie mit dem Gaussia Luciferase Complementation-Assay in vivo, abgeklärt. Des Weiteren sollte die Verteilung und eine mögliche Aggregation von Profilin1 in HEK293-Zellen (Human Embryonic Kidney-Zellen) mit einer immunchemischen Färbung dargestellt werden. In einer Co-Immunpräzipitation mit HEK293-Lysaten (Human Embryonic Kidney-Zellen) konnte gezeigt werden, dass die Mutation T109M weiterhin unverändert Aktin bindet. Die Mutanten C71G und G118V hingegen zeigten keine Aktinbindung mehr. Diese Ergebnisse konnten mit einem Gaussia Luciferase Complementation-Assays auch in vivo bestätigt werden. Profilin1 könnte damit eine wichtige Rolle im Netzwerk der ALS-assoziierten Proteine einnehmen, da es mit mehreren Proteinen wie Aktin, survival of motor neuron (SMN), Fused in Sarcoma (FUS) etc. in direkter oder indirekter Verbindung steht.