Der Einfluss von NF-kB auf die Expression des Transkriptionscoaktivators BOB.1/OBF.1

Abstract

Der lymphozytenspezifische Transkriptionscoaktivator BOB.1 bindet zusammen mit den Transkriptionsfaktoren Oct-1/2 an die DNA und reguliert die spezifische Genexpression in B-Zellen. BOB.1 spielt eine wichtige Rolle in der B-Lymphopoese; unter Defizienz ist v.a. die Keimzentrumsbildung und die Reifung verschiedener B-Zell-Subpopulationen gestört. Bisher ist wenig über die Regulation dieses Faktors bekannt. BOB.1-defiziente Mäuse weisen phänotypische Gemeinsamkeiten mit NF-kappaB-mutierten Mäusen auf, weiterhin sind bekannte BOB.1-Inducer wie Lipopolysaccharid (LPS) gleichsam Aktivatoren des Transkriptionsfaktors NF-kappaB. In der vorliegenden Arbeit wurde daher die mögliche Regulation der BOB.1-Expression durch NF-kappaB untersucht. Hierfür wurden primäre B-Zellen aus der murinen Milz isoliert und anschließend u. a. mit TLR-Liganden, die den klassischen NF-kappaB-Signalweg aktivieren, stimuliert. Anschließend wurde die BOB.1-Expression mittels Westernblot dargestellt und mit der NF-kappaB-Aktivität im EMSA verglichen. Es konnte gezeigt werden, dass die Expression von BOB.1 durch alle untersuchten TLR-Liganden induzierbar ist, v.a. durch LPS, Imiquimod und ODN (entsprechend TLR 4, 7/8 und 9). Ein weiterer bekannter BOB.1-Inducer ist der CD40-Ligand, der zur Aktivierung des alternativen NF-kappaB-Signalweges führt. Erstmals konnte BAFF (B cell activating factor), ebenfalls Aktivator des alternativen Signalweges, als Inducer der BOB.1-Expression in B-Zellen identifiziert werden. Um nachzuweisen, dass die TLR-vermittelte Induktion der BOB.1-Expression auf der Aktivierung von NF-kappaB beruht, erfolgte die gezielte Ausschaltung von NF-kappaB: In wildtypischen B-Zellen, die eine Inhibition von NF-kappaB erfuhren, zeigte sich nach Stimulation mit TLR-Liganden eine deutliche Reduktion der BOB.1-Expression. Somit konnten konkrete Hinweise für die Beteiligung von NF-kappaB an der Regulation der induzierbaren BOB.1-Expression gefunden werden!