Isolierung und Charakterisierung von Forkhead Transkriptionsfaktoren der Subklasse P in Xenopus laevis

Abstract

Evolutionär konservierte Fox (Forkhead box) Transkriptionsfaktoren spielen eine wichtige Rolle bei vielen Entwicklungs- und Differenzierungsprozessen. Die vorliegende Arbeit beschreibt die Identifizierung und Charakterisierung mehrerer Mitglieder der Fox Subklasse P in Xenopus laevis. DNA-Datenbankanalysen und das Screening einer ?ZAP-cDNA-Tadpole Bibliothek führten zur Isolierung von insgesamt sieben unterschiedlichen FoxP cDNA Klonen (FoxP1b, FoxP1c, FoxP2a, FoxP2b, FoxP4a, FoxP4b, FoxP4c). Für die FoxP1b Variante konnte mittels GST-Pulldown Assay gezeigt werden, dass durch den Gebrauch eines zusätzlichen Exons (Exon 13) die Bindungsstelle des Co-Repressors CtBP1 (C-terminal binding protein 1) unterbrochen wird und dadurch dieses Protein nicht mehr an FoxP1b binden kann. Das zeitliche und räumliche Expressionsmuster der FoxP Gene während der embryonalen Entwicklung von Xenopus laevis wurde mittels RT-PCR und Whole Mount in situ Hybridisierung analysiert. Um einen Gain-of-Function zu bewirken, wurde FoxP1 mRNA in die dorsalen Blastomeren eines Xenopus laevis Embryos im Vier-Zell-Stadium injiziert. Die sich entwickelnden Embryonen zeigten eine starke Reduktion der Körperachse und einen Verlust der Kopfstrukturen.