Charakterisierung des zellulären Transports His-markierter Proteine über das PA-Transportsystem

Abstract

Schon länger besteht der Wunsch nach spezifischen Therapieformen, die nur betroffene Zellpopulationen beeinflussen sollen. Nebenwirkungen durch unselektive Aufnahme in diverse Gewebe eines Organismus könnten so minimiert werden. In der vorliegenden Arbeit wurde dazu der Transport Histidin-markierter Proteine über an C3 gekoppeltes, mutiertes Protektives Antigen (C3mPA) untersucht. C3 ist ein von Clostridien und Staphylokokken produziertes Toxin. Protektives Antigen (PA) ist die Bindungs- und Transportuntereinheit des Anthraxtoxins von Bacillus anthracis. C3mPA ist ein selektives Transportsystem für monozytäre Zellen. Dabei wurde bestätigt, dass der Transport von His-markierten Proteinen, in dieser Arbeit His-C2I (Toxinuntereinheit von Clostridium botulinum) und His-TccC3 (Toxinuntereinheit von Photorhabdus luminescens), über Wildtyp-PA in das Zytosol effektiv funktioniert. In Zellversuchen mit J774A.1 und RAW 264.7 (zwei Makrophagen-Zelllinien) konnte dies anhand der Morphologieänderung der Zellen nachgewiesen werden. Allerdings konnte dieses Ergebnis nicht auf His-PTS1 (His gekoppelter, enzymatisch aktiver Teil des Pertussistoxins) übertragen werden. Auch der Transport von His-markierten Proteinen über den untersuchten Transporter C3mPA konnte im Zellversuch nicht verwirklicht werden. Die mit C3mPA und einer enzymatischen Komponente vergifteten Zellen zeigten keine typische Morphologieänderung wie in den Kontrollen mit Wildtyp-PA. Die daraufhin durchgeführten Versuche sprechen allerdings dafür, dass C3mPA an den Zielzellen binden kann und in die Zellen aufgenommen wird.